本试剂盒采用SDS 碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性吸附DNA。 同时采用特殊溶液（Buffer ETR） 有效去除内毒素，可20 min内从1-4 ml 细菌培养物中提取出多至30 μg高纯度质粒DNA，其内毒素水平控制 在0.1 EU/μg 以下。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性

RNase A：50 mg/ml，室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。

Buffer S1A：细菌悬浮液。加入RNase A 后，混合均匀，4℃贮存。

Buffer S2A：细菌裂解液（含 SDS/NaOH ），室温密闭贮存。

Buffer S3K：中和液，室温密闭贮存。

Buffer W2B concentrate：去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。

Buffer B：DNA结合溶液，室温密闭贮存。

Eluent A：洗脱液。室温密闭贮存。

Buffer ETR：内毒素去除液。室温密闭贮存。

二、注意事项

1. 细菌过量将影响细菌裂解、质粒DNA 的释放，导致内毒素含量过高。

2. 步骤3和步骤4的操作必须温和。剧烈摇晃将导致基因组 DNA 的污染。但混合必须充分，否则影响得率。

3. 使用前，检查Buffer S2A是否出现沉淀，如出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后使用。

4. Buffer S2A 、Buffer S3K和 Buffer B含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和防护眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣物，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

三、实验准备

1. 第一次使用前，RNase A 全部加入 Buffer S1A中，4℃贮存。

2. 第一次使用前，Buffer W2B concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。

3. Eluent A在65℃预热后使用，能提高质粒得率。

4. Buffer ETR 使用前放到4℃预冷。

5. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。

6. 准备42℃水浴。