本试剂盒采用SDS碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性吸附DNA。同时采用特殊溶液（Buffer ETR 和 Buffer PF）有效去除内毒素，可从1-4 ml（OD₆₀₀为1-1.5）细菌培养物中提取出多至30 μg高纯度质粒DNA，其内毒素水平控制在0.1 EU/μg以下。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性

RNase A：50 mg/ml，室温可贮存6个月，长期贮存于-20 ℃ 。

Buffer S1：细菌悬浮液。加入 RNase A后，混合均匀，4℃贮存。

Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。

Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。

Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。

Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或 95%乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。

ET-free water（70% Ethanol）：使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%

乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。

Eluent A：洗脱液。室温密闭贮存。

Buffer ETR：内毒素去除液。室温密闭贮存。

Buffer PF：分相缓冲液。室温密闭贮存。

二、注意事项

1. 细菌过量将影响细菌裂解、质粒DNA 的释放，导致内毒素含量过高。

2. 步骤3和步骤4的操作必须温和。剧烈摇晃将导致基因组 DNA 的污染。但混合必须充分，否则影响得率。

3. 使用前，检查Buffer S2 是否出现沉淀，如出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后使用。

4. Buffer S2 、Buffer S3和 Buffer W1和 Buffer B含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和防护眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣物，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

三、实验准备

1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中 ，4℃贮存。

2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip 头、离心管。

3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。

4. 第一次使用前，ET-free water（70%Ethanol）中加入指定体积的无水乙醇。使用前置于-20℃预冷。

5. Eluent A在 65℃预热后使用，能提高质粒得率。

6. Buffer ETR 使用前放到4℃预冷。