产品概述：
产品货号：M7426S, M7426M
产品规格：20 rxns, 100 rxns
储存条件：2~8℃保存，有效期见外包装
应用范围：粪便样本中核酸的提取、富集、纯化等
产品组分
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组分 |
组分含量 |
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M7426S |
M7426M |
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A.裂解液 |
12 mL |
60 mL |
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B.结合液 |
6 mL |
30 mL |
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C.磁珠悬液 |
0.4 mL |
2 mL |
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D.洗涤液A |
15.2 mL（首次使用前请加入0.8 mL的异丙醇） |
76 mL（首次使用前请加入4mL的异丙醇） |
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E.洗涤液B |
8 mL（首次使用前请加入8 mL的异丙醇） |
40 mL（首次使用前请加入40 mL的异丙醇） |
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F.洗涤液C |
8 mL（首次使用前请加入32 mL的无水乙醇） |
40 mL（首次使用前请加入160 mL的无水乙醇） |
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G.洗脱液 |
5 mL |
25 mL |
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H.蛋白酶K |
4 mg |
20 mg |
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I.溶液A |
0.4 mL |
2 mL |
注：需用户自备异丙醇（分析纯）、无水乙醇（分析纯）。
产品介绍
粪便样本中的人脱落细胞以及肠道菌群经裂解后核酸释放，利用磁珠与核酸特异性高效结合，并利用磁性分离器或磁棒使磁珠吸附于管壁或磁棒套，通过洗涤、洗脱过程得到所需的核酸。不同来源的固体和液态粪便样本使用前请充分混合，防止样本不均一。
适配仪器
本试剂盒适用于磁珠法吸附原理的自动化核酸提取仪，也可进行手工提取。
实验步骤
一．手动操作流程
首次使用前：
1. 在洗涤液A中加入指定量（见瓶身标签）的异丙醇，并于“□”内打上“√”，混匀后于室温下密闭保存。
2. 在洗涤液B中加入指定量（见瓶身标签）的异丙醇，并于“□”内打上“√”，混匀后于室温下密闭保存。
3. 在洗涤液C中加入指定量（见瓶身标签）的无水乙醇，并于“□”内打上“√”，混匀后于室温下密闭保存。
4. 在蛋白酶K干粉中加入指定量（见管身标签）的溶液A，并于“□”内打上“√”，混匀后于2~8℃保存，或分装后于-20℃保存。
二．客户自备物品
1.1.5 mL离心管：2个/样品
2.2 mL离心管：1个/样品
3.单通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
4.漩涡振荡器
5.离心机
6.恒温金属浴（或水浴锅）：70℃/55℃
7.磁性分离器
三．操作步骤（以200 mg粪便样本为例，1 g样本加样要求参见表1）：
1. 样本采集：移取180 mg-220 mg粪便样本到2mL离心管中。
2. 裂解
（1）在上述2 mL离心管中加入600μL的裂解液（使用前65℃水浴5-10 min至溶液澄清），再加入20μL的蛋白酶K（检查是否已加入溶液A），调整合适的转速漩涡振荡1 min，使其充分混合，再将离心管置于70℃加热20 min，90℃加热10 min，期间震荡混匀三次。
（2）13000 rpm离心3 min，取300 μL上清至一个新的1.5 mL EP管中。若为1 g粪便样本体系，取上清1.5 mL至新的15 mL EP管中。
3. 结合：在上述1.5 mL离心管中加入300 μL结合液，200 μL异丙醇，20 μL磁珠悬液，震荡混匀30 s，室温结合5 min，期间颠倒混匀两次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
注：此步骤磁性分离时间应不少于2 min。
4. 洗涤
（1）加入800μL洗涤液A，震荡混匀30 s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
（2）加入800μL洗涤液B（检查是否已加入异丙醇），震荡混匀30 s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
（3）加入800μL洗涤液C（检查是否已加入无水乙醇），震荡混匀30 s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
（4）重复步骤（3）一次（若为1 g粪便样本体系，该步仅加入1 mL洗涤液C，震动混匀后转移至1.5 mL EP管中）。
注：步骤（4）应尽量除尽洗涤液。
5. 干燥：保持离心管于磁力架上，将其置于超净工作台中风干至磁珠表面无明显光泽（5-7 min）。
6. 洗脱：加入50μL 65℃预热的洗脱液，震荡混匀30 s，于65℃加热5 min后，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的1.5 mL离心管中，此即为纯化得到的基因组DNA，可保存于-20℃。
表1.不同样本量对应使用的反应管规格和试剂加入量
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样本体积 反应管/试剂 |
200 mg |
1g |
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反应管规格 |
2mL |
15 mL |
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蛋白酶 K |
20 μL |
100 μL |
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粪便样本 |
200 mg |
1 g |
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裂解液 |
600 μL |
3 mL |
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结合液 |
300 μL |
1.5 mL |
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异丙醇 |
200μL |
1mL |
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磁珠悬液 |
20 μL |
40 μL |
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洗涤液A |
800 μL |
4mL |
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洗涤液B |
800 μL |
4mL |
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洗涤液C |
800 μL |
4 mL |
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洗脱液 |
50 μL |
100 μL |
二、自动化操作流程
可以适配市面上大部分品牌核酸提取仪，详细参数请联系我司技术支持或设备厂商技术支持。
注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品手册。
2. 提取效果与粪便样本质量有关。
3. 蛋白酶K干粉溶解后，可分装储存于-20℃，但应避免反复冻融。
4. 应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
5. 磁珠取用前应充分重悬均匀。
6. 磁珠干燥前，应用移液器吸尽洗涤液；应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。
7. 建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失。
8. 本产品使用后请按医疗垃圾进行处理。
9. 使用前请检查各组分是否存在析出情况，如有析出，请将试剂瓶置于60℃水浴加热溶解后使用。
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