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  • UE质粒中量制备试剂盒

    产品货号: UE-MD-P-10/UE-MD-P-25

    产品规格: 10T/25T

    目录价(元):675/1262

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产品概述:

储存条件
RNase A: 50 mg /ml,室温贮存6个月;长期贮存于-20℃。
Buffer S1: 细菌悬浮液。加入RNase A后,混合均匀,4贮存。
Buffer S2: 细菌裂解液(含SDS/NaOH)。室温密闭贮存。
Buffer S3K : 中和液,室温密闭贮存。
Buffer B: DNA结合溶液,室温密闭贮存。
Buffer W1: 洗涤液,室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Eluent : 洗脱液 室温密闭贮存。



流程图


说明书:



常见问题解答:


同样体积的新鲜菌液,为什么有些提取的质粒浓度高,而有些质粒的浓度低?这些情况应该如何处理?
质粒提取高低的一个重要决定性因素是质粒载体的拷贝数,即质粒在一个大肠杆菌中的数目。对于低拷贝数的质粒,需要适当增加菌液的收集量,详情请参阅说明书。
以下是几种常见载体的拷贝数:


使用UE质粒中量制备试剂盒时,在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法?
不建议使用。UE质粒中量制备试剂盒中的质粒制备管不能与常规的15ml,50ml离心管配套,所以无法使用。您可以通过使用负压装置来解决这一问题。如果无法取得相配套的负压装置,可以尝试手推过滤器的方式进行,但这样的操作容易引起污染。

我提取的质粒为什么会有基因组条带?
菌体在裂解和中和过程中如果操作过于剧烈就容易引起基因组污染。加入Buffer S2后要轻柔混匀,加入Buffer S3后混合均匀。如果发现裂解物在操作过程中过于黏稠,需要适当降低菌体的用量。

我提取的质粒在电泳图片上看,有一条紧挨着主带的小条带请问这是什么原因?如何判定它是否是杂带?
那条带很有可能就是变性条带。如果在加入Buffer S2后没有及时混匀菌体,会导致菌体局部碱性过强,破坏质粒的结构,在加入Buffer S3后质粒无法完全复性,就产生了这样的变性条带。
检测的方式是通过酶切检测,如果这条带在酶切后依然存在,则是变性条带,如果酶切后消失,则可能是质粒的不同状态。

我提取的质粒有明显的RNA污染,请问是什么原因?
可能有以下两种可能:
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室温放置,RNase A活力会下降,导致RNA污染。
2、菌体过量。如果使用的菌体量过多,也可能导致RNA污染。适当减少菌体的用量。

质粒得率很低,请问是什么原因?
质粒低的可能因素很多,以下是几种可能原因:
1、菌体过量,导致菌体不能完全裂解和中和,最终导致质粒得率低。
2、Buffer W2中未按瓶子上得标注体积加入乙醇。
3、菌体老化,影响提取的效果。建议对菌液进行划板培养,筛选新鲜克隆。

请问Eluent Buffer的配方是什么?对于DNA测序有没有影响?
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。质粒在这样的溶液中能够稳定保存,而且测序不受影响。

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