产品概述：
本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8 μg DNA（70 bp-10 kb），回收率为60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液（DE-A溶液）中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
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一 、试剂盒组成、贮存、稳定性 |
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Cat.No. |
UE-GX-10 |
UE-GX-50 |
UE-GX-250 |
UE-GX-500 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
500 preps |
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Miniprep column C15 |
10 |
50 |
250 |
500 |
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2 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
500 |
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1.5 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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Buffer DE-A |
14 ml |
2×33 ml |
2×165 ml |
2×330 ml |
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Buffer DE-B |
7 ml |
33 ml |
165 ml |
330 ml |
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Buffer W1 |
6 ml |
28 ml |
145 ml |
280 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
2×72 ml |
2×120 ml |
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Eluent |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
50 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
1 |
Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解。室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70 bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上）。室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
二、注意事项
1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. 在凝胶回收步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型 DNA长时间暴露在高温条件下易于水解)，从而提高回收率。勿将含 DNA 的凝胶时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对 DNA造成的损伤。
3. 在凝胶回收步骤2中，凝胶必须完全熔化，否则将严重影响 DNA 回收率。
4. 如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如果pH大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加3M 醋酸钠调节pH至4-6之间。
5. 将 Eluent 或去离子水加热至 65°C，有利于提高洗脱效率。
6. DNA分子呈酸性，建议在 2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。
7. 回收率低建议：
1）步骤3之后混合液转移至制备柱可以放置2-5 min；
2）步骤3之后混合液过柱离心之后将滤液再次重复离心；
3）加热洗脱液温度；
4）洗脱液二次重复洗脱。
常见问题解答：
◆回收率低
·目的片段结合量低
通常这是因为样品中琼脂糖过多或者质量不好或者溶解不充分所导致。
对于小于400bp的片段回收时未加异丙醇会降低片段的结合量，因此要务必确保已加入了1倍体积量的异丙醇（100%）。
电泳缓冲液PH值过高，影响目的片段的结合。
·结合的DNA片段过早的被洗脱
buffer W2 中未加无水乙醇或者加入的乙醇不是95-100%的，都将会导致DNA片段在后续的洗涤过程中过早的被洗脱下来。因此要务必确保加入了正确的乙醇量。每次使用后应拧紧瓶盖，以免乙醇挥发，降低回收率。
·洗脱效率低
最后一次buffer W2洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽的过干。为了提高洗脱效率可将洗脱液在65℃预热。若用去离子水洗脱，请确保其PH值在7.0-8.5之间。
选用合适浓度的琼脂糖凝胶电泳，上样量不超过制备管的最大结合量（8ug）。切胶要迅速，防止紫外线对DNA的损伤。
◆酶切反应不理想
·盐分残留
可以用2×Buffer W2进行洗涤
·乙醇残留
在最后一次Buffer W2洗涤后可将制备管由原来离心1min增加至离心2min。
·琼脂糖残留
为了确保完全去除琼脂糖，应确保琼脂糖块在Buffer DE-A中完全溶解。切胶时尽可能只保留含有DNA片段部分的凝胶以便于对琼脂糖的处理。
·琼脂糖凝胶电泳呈小弥散带
可能洗脱产物中含有ssDNA，需将洗脱产物95度加热2min，慢慢冷却至室温，使单链DNA重新退火即可。
◆膜脱落
·琼脂糖有残留，堵塞膜孔，导致膜在高速离心时受力过大，引起膜脱落或者膜下端突出，影响DNA回收
◆UE质粒小量制备试剂盒中的制备管能否与UE DNA凝胶回收试剂盒中的制备管替换使用？
不能。两种制备管都是基于硅胶膜技术，但是各自的制备管只有与各自试剂盒中的试剂盒配套才能达到最佳效果。质粒小量试剂盒结合能力最大为20µg，最长的质粒片段为50kb。胶回收试剂盒最大结合能力为8µg，最长的DNA结合片段为10kb。
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