产品介绍
总RNA小量提取试剂盒(升级版)
本试剂盒采用硅膜柱纯化技术,全程无需苯酚/氯仿抽提、醇沉淀步骤,20分钟即可快速获取完整高纯度 RNA。配备gDNA 去除柱,可高效清除基因组 DNA残留,适配对微量DNA污染高度敏感的各类下游实验。
体系采用强变性裂解体系,快速灭活内源RNase,提取RNA 完整性高;搭配专用硅基质吸附膜与配套缓冲液,特异性捕获核酸,经多步洗涤彻底去除蛋白、酶抑制剂等杂质。纯化所得RNA以无酶纯水洗脱,无蛋白、核酸酶残留,可直接用于 RT-qPCR、NGS 测序等分子实验,短期-20℃、长期-80℃稳定保存。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
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Cat.No.
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UE-MN-MS
-RNA-V2-10
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UE-MN-MS
-RNA-V2-50
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UE-MN-MS
-RNA-V2-250
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Kit size
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10 preps
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50 preps
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250 preps
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gDNA removing/RNA binding Column
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20个
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100个
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500个
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Collection Tubes(2mL)
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20个
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100个
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500个
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Buffer RL-1
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8 mL
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40 mL
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200 mL
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Buffer PL-1
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8 mL
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40 mL
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200 mL
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Buffer RW1
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8 mL
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40 mL
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200 mL
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Buffer RW2
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2.4 mL
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12 mL
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60 mL
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RNase-Free ddH2O
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2 mL
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10 mL
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30 mL
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Protocol manual
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1
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1
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1
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Buffer RL-1/Buffer PL-1:细胞裂解液。根据细胞样本类型,进行选择使用,详见表1。室温密闭贮存。 低温下可能会有沉淀析出,需在60℃水浴让沉淀完全溶解并冷却至室温后使用.
Buffer RW1:洗涤液1。室温密闭贮存。
Buffer RW2:洗涤液2。使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用100% 乙醇或 95%乙醇)。混合均匀,室温密闭贮存。
RNase-Free ddH2O:洗脱液。室温密闭贮存。
二、注意事项
1. RNA提取完成后建议置于冰上待用,若不能立刻进行后续实验,请保存于-80℃。
2. RNA分管尽快使用,电泳检测用无酶水进行冲洗,电泳缓冲液用RNA无酶水配置,提高电压并缩短跑胶时间。
3. 选新鲜组织样本,避免反复冻融,组织离体后须迅速放入液氮中速存,后期转移至-80℃长期保存。
4. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管,以避免提取过程中RNA被RNase降解。
三 、实验准备
1. 自备试剂:70%乙醇(无核酶水配置)、无水乙醇(AR)、β-巯基乙醇或DTT。
2. Buffer RL-1/Buffer PL-1低温下可能会有沉淀析出,需在60℃水浴让沉淀完全溶解并冷却至室温后使用。
3. Buffer RW2为浓缩液,使用前按试剂瓶子标签,加入无水乙醇。
4. (可选)提升裂解液的变性能力:使用前分装适量Buffer RL-1/Buffer PL-1,按每mL Buffer RL-1/Buffer PL-1加入10µL β-巯基乙醇或20μL的2M DTT,混合液室温可保存1月。β-巯基乙醇/DTT 能打断 RNase分子间的二硫键,高效灭活 RNase,提高RNA质量。由于β-巯基乙醇/DTT 的毒性,若简单样本,不添加也可以得到完整的RNA。
5. 对于植物样本,若不确定种类,推荐优先尝试Buffer PL-1 。
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样本种类
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推荐样本量
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样本示例
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推荐裂解液
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Buffer RL-1
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Buffer PL-1
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细胞/阴性细菌
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<107个
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通用
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√
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动物组织
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≤20mg
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通用
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√
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简单植物组织 (叶片、根、茎)
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50-100mg
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小麦、水稻、玉米、菠菜、娃娃菜、豌豆苗、根茎
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√
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多糖多酚植物叶片
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桃叶、梅叶、梨叶、葡萄叶、月季花瓣
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√
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淀粉含量高的植物组织
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20-50mg
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玉米种子、红豆种子、土豆
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√
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油性高的植物组织
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油菜籽
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√
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√
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水果果肉类植物
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100-500mg
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西瓜、苹果
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√
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真菌类植物
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20-100mg
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香菇、金针菇
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√
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表1 不同种类样本推荐的样本处理量及裂解液