FAQ

问：条带为什么和其他厂家的Marker指示条带不一致？是不是不准？

答：(1)我们的蛋白Marker条带大小均是通过非预染Marker进行标定的。 (2)不同厂家的Marker相同大小条带存在差异是正常现象，获得的目的条带的方式可能造成此影响。 (3)我们内部测试过不同厂家的Marker，相同凝胶浓度跑胶条带分离情况类似，条带大小差异不大。

问：条带分不开是什么原因造成的？该怎么解决？

答：(1)请注意选择合适的凝胶浓度，每个浓度的凝胶是有最佳的分离范围的。 (2)请注意跑胶的时间。跑胶时间过长，可能导致小条带出现重叠在一起；跑胶时间过短，条带还没完全分开。 (3)请注意上样量，上样量过大，不同大小条带条带过粗，分离可能不清，建议按照说明书推荐上样量。 (4)请注意闭合电路的完整。确定胶板胶条移除；确定电泳液最终液面到上样孔以上；确定胶板放置正确；确定电泳槽不要漏液。 (5)请注意使用新鲜电泳液。

问：在跑胶时，蛋白条带清晰，颜色明亮，但转膜后发现条带变淡，抗体剥离液越清洗条带越淡是什么原因？该怎么解决？

答：(1)转膜不完全。凝胶上还有残留蛋白，导致没有完全转膜。建议延长转膜时间。 (2)转膜时间过长。转膜时间过长，导致蛋白条带穿过PVDF膜，转到了滤纸上。请缩短转膜时间。 (3)转膜“三明治”结构不紧密，夹子过松，导致转膜闭合电路接触不良，蛋白条带到转膜液中或者没有转上。建议重新换一个夹子。 (4)抗体剥离液可能会影响蛋白Marker条带的亮度，建议在范围内多上些Marker。

问：ECL显影发现个别的蛋白Marker条带也被显影出来是什么原因？该怎么解决？

答：(1)请选用特异性好的一抗。可能是非特异标记。 (2)一抗识别的抗原决定簇是十几个氨基酸序列，可能是蛋白Marker的氨基酸序列是具有相似的结构，所以可能会被标记上。 (3)请降低一抗的稀释浓度。降低非特异性标记的可能。

问：条带模糊是什么原因造成的？

答：(1)蛋白上样量过少或者过多都可能导致条带模糊。 (2)电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。 (3)电泳缓冲液陈旧，pH值不在缓冲范围内。 (4)存储或取用不当，导致蛋白降解。

问：蛋白条带消失是什么原因造成的？

答：(1)保存不当导致的蛋白条带降解。 (2)电压不稳，可能也会导致蛋白条带消失。

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