产品介绍

产品货号：P4036

产品规格：1 mg

应用范围：核酸染色

产品参数

外观：可溶于DMSO、DMF或水的深红色固体

Ex (pH 3) = 464 nm (before photolysis)

Ex/Em (after photocrosslinking to nucleic acid) = 510/610 nm

分子式：C27H32Cl2N6

分子量：511.5

储存条件：4℃避光保存，有效期见外包装。

4℃避光保存，有效期见外包装。

产品介绍

PMA是一种高亲和性的DNA结合染料，该染料本身具有微弱的荧光，但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光。它尤其与双链DNA具有高亲和性。PMA不具有细胞膜渗透性，因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的 DNA。PMA修饰的DNA经蓝光（~464 nm）光解后，PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基，与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键，从而导致永久性 DNA 修饰（图1）。该修饰过程会使DNA不溶，并使其在随后的基因组DNA提取过程中与细胞碎片一起丢失，进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增。残留在溶液中未结合的PMA，在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物，使羟胺不再能够共价结合DNA，从而不影响PCR扩增。这个特性使得 PMA 可以通过实时定量 PCR（qPCR）的手段，检测多种样本类型包括：细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞；与qPCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术相结合，广泛应用在食品和水安全和环境测试中。

图1. PMA修饰DNA后通过qPCR定量活菌和死菌的原理

使用方法

使用前注意事项

1. PMA根据细胞膜通透性区分死菌和活菌。许多杀死细菌的方法会导致细胞膜受损，因此适用于PMA检测。 但有些方法，如紫外线照射，可能不会立即导致细胞膜破裂。 因此，在选择PMA检测之前，需先进行文献检索和预实验确定是否适用于您选择的细菌类型和杀伤方法。

2. PMA处理完细菌后需要进行光解，以使染料与死细胞 DNA 共价结合。

注：光解操作可以使用蓝色或白色光源。一般来说，灯越亮，光解步骤的效率就越高。非 LED 灯（如卤素灯）可能会加热您的样本并对分析产生负面影响，照射时需要使用冰块对样品降温处理。

3. 样本可以在光解后冷冻保存。若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果。如需在检测之前冷冻样本，建议先进行预实验。

4. PMA 的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除 PMA 共价修饰的DNA；因此，在提取基因组DNA时，需使用相同体积的基因组DNA洗脱液，进行体积归一化处理。阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA。

5. 为了验证PMA在测试样本中的有效性，可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct (dCt)变化。

实验材料（自备）

光源（用于PMA修饰DNA后的光解步骤）

细菌基因组 DNA 提取试剂盒

配套的qPCR Mix试剂盒

对应样本类型的有效qPCR引物

实验前储液配制

向管中加入98 μL超纯水，涡旋混匀，配制为20 mM 的PMA的储液。