产品介绍

产品介绍

YO Dye SE可以与氨基基团反应生成稳定的酰胺键。本公司提供多种性价比高的氨基反应染料，用于标记蛋白质和其他含胺化合物。

应用范围

氨基标记染料

产品规格

1 mg

产品货号

产品参数

光谱图

储运条件

-20℃干燥避光保存，有效期见外包装；冰袋运输。

注意事项

1. 荧光染料激发与发射波长会受到溶剂的影响，使用不同溶剂，则激发与发射波长可能会发生变化。

2. 标记的蛋白如需长期储存，推荐加入5-10 mg/mL BSA和0.05-0.1% ProClin™ 300，以防止蛋白变性和微生物滋生。放置于4℃避光保存。若加入终浓度为50%的甘油，可放-20℃稳定保存一年以上。

3. 操作过程注意避光，避免产生气泡。

4. 层析柱装柱时，尽量使柱体均匀，柱面平整，无气泡、裂隙。

5. 上样时注意，当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品，洗脱时，当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。

6. 影响标记效率的其他因素还包括：温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等，需注意控制。

7. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。

自备材料

1. 试剂

(1) 蛋白溶液不可含有能与染料反应的胺类化学物质，如氨基酸、Tris、BSA、明胶等。如果蛋白中含有此类化学物质，应用pH~7.4的PBS缓冲液预先透析处理。低浓度(< 3 mM)叠氮化钠的存在不会产生干扰与标记反应。

(2) PBS缓冲液（pH 7.4）。

(3) 0.2 M NaHCO3溶液，用2 M NaOH将pH值调至9.0。

(4) 溶液C：向20份溶液0.2 M NaHCO3溶液中加入1份PBS缓冲液（pH 7.4），得到pH 8.3的标记缓冲液。保存在密封瓶中，该溶液可长期保持稳定。

(5) 葡聚糖凝胶G-25透析柱。

使用方法

1. 标记方法和步骤

(1) 将1~5 mg蛋白溶解在1 mL溶液C中。

(2) 将1 mg染料溶解在50–200 µL无水、不含胺的DMSO中，充分震荡混匀。

(3) 取适当体积的染料加入蛋白质溶液中，使染料/蛋白的摩尔比在3:1，由于蛋白质和标记试剂的不同反应性，可能会发生变化。这可能需要优化反应中使用的染料与蛋白质的比例，以获得所需的DOL。

(4) 室温孵育1 h。对于YO565 SE建议孵育18 h以完成标记反应。

(5) 用PBS缓冲液（pH 7.4）平衡葡聚糖凝胶G-25透析柱。

(6) 将步骤（4）反应溶液加入柱子，并用PBS 缓冲液（pH 7.4）洗脱。首先洗脱出来的着色带是染料-蛋白结合物。

注：为防止洗脱后偶联物发生变性，可添加牛血清白蛋白(BSA)或其他稳定剂。

2. DOL计算

DOL=c(dye)/c(protein)

=(Amax/εmax)/(Apro/εpro)

=(Amax·εpro)/[(A280–Amax·Cf)·εmax]

a. εpro为蛋白的摩尔吸光系数；

b. A280和Amax分别是指在280 nm处的吸光度以及在最大吸收波长处的吸光度；

c. Cf是校正因子，参考上面表格；

d. εmax为染料的摩尔吸光系数。