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  • UE-96体液病毒DNA/RNA纯化试剂盒

    产品货号: UE-96-BF-VNA-4/UE-96-BF-VNA-12

    产品规格: 4T/12T

    目录价(元):10967/26323

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产品概述:

储存条件
Proteinase K: 冻干的蛋白酶K可室温贮存6个月,长时间保存请置于4; 溶解后,在2-8可贮存2个月,长时间保存请勿置于室温中。

PK Buffer: 蛋白酌K溶解液,室温密闭贮存。
Buffer AVL: 病毒裂解液,4℃贮存。
BufferW1A: 洗涤液,使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。 使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Buffer TE (nuclease-free): 洗脱液。无DNA/RNA酶活性。
96-well VNA plate: 96孔制备板。


流程图


说明书:



常见问题解答:


PCR或者RT-PCR扩增多条带/片段大小不对
考虑操作环境中的污染,如试剂、塑料耗材等。做一个阴性对照,确定扩增出有正确条带的多带污染的来源(塑料/试剂)。

PCR扩增不出
·引物、试剂或者是退火温度等设置的问题
做质控,确认原因。
·忘记在Buffer W2中加乙醇。
确认加入的是100%乙醇或者95%乙醇。如果对Buffer W2有疑问 ,可以用70%乙醇临时代替检验结果。
·病毒滴度低
尽量提高病毒的使用量,重新PCR。增加PCR循环数。设置阳性质控。
·病毒DNA降解
由于病毒在生物样本中的含量往往很低,并且处理要很小心。在操作时尽量去除可能影响病毒得率的污染源。

RT-PCR扩增不出条带
·病毒滴度低
尽量提高RNA病毒的量,重新RT-PCR。提高RT-PCR循环数。设置阳性质控。
·RNA病毒降解
由于病毒在生物样本中的含量往往很低,并且处理要很小心。在操作时尽量去除可能影响病毒得率的污染源。比如使用经过DEPC处理过的材料。加入RNasin(1unit/ul)到纯化好的RNA病毒中也可以提高RNA的稳定性。
·引物、试剂或者是退火温度等设备问题

病毒DNA/RNA产量低或没有DNA/RNA洗脱下来
·高水平的RNA酶活性导致RNA降解
严格按照RNA提取注意事项创造无DNA/RNA酶环境,得到的DNA/RNA产物应该立刻使用或者保存在-80℃。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后,充分溶解,按照每次使用量分装冻存,避免反复冻融。
·DNA/RNA仍在柱子上。
重复洗脱。
洗脱前将DEPC水预热到70℃。
离心前将DEPC水加入柱子膜中央,使洗脱液完全浸润制备膜,并静置5min。
·柱子吸附量超载。
减少加入柱子中的样品量。
增加蛋白酶K消化时间。
·Buffer W2中未加无水乙醇。
检查试剂瓶标签并在Buffer W2中加入正确体积的无水乙醇。

DNA/RNA降解
·样本有问题。
样品应该保存在液氮或者-80℃直到使用,不能反复冻融。
严格按照操作说明书快速提取RNA。
样本本身病毒RNA含量低。
·DNA/RNA酶污染
严格按照RNA提取注意事项创造无RNA酶环境,确保在操作中未引入RNA酶。
检查溶液是否有RNA酶污染。

低核酸产量或者纯度不高
·试剂盒储存在非最佳条件
收到试剂盒后总是存放在室温(15℃-20℃)。
·缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下
储存在室温(15℃-20℃)每次用完后立刻盖紧盖子,以免溶液蒸发、PH改变和污染。
·缓冲液Buffer W2中忘记加无水乙醇
第一次实验时,在缓冲液Buffer W2中加入指定量无水乙醇。
·试剂和样品没有充分混匀
加入每个试剂后都要充分混匀。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后,充分溶解,按照每次使用量分装冻存,避免反复冻融。
·洗脱效率不高
确保缓冲液Buffer W2已清除干净,否则残留乙醇会影响洗脱效率 ,仔细阅读洗脱操作步骤。

纯化的DNA/RNA产物OD260数值异常偏高
·一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了分光光度计读数
建议:将洗脱的回收DNA/RNA溶液12,000×g再离心一分钟,小心取上清使用。

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