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  • 人单核细胞趋化蛋白1 ELISA试剂盒(Human MCP-1 ELISA KIT)

    产品货号: H6134S/H6134M/H6134L

    产品规格: 24T/48T/96T

    目录价(元):952/1587/2698

    推荐仪器:酶标仪

    大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见说明书。

组分

24T

48T

96T

使用方法

开封后保存条件

A. 标准品

1000 pg

1000 pg

1000 pg

按说明书进行稀释

-20℃可存放一月

B. 标准稀释液

16 mL

16 mL

16 mL

即用型

4可存放一月

C. 浓缩生物素化抗体(100×

30 μL

60 μL

2×60 μL

按说明书进行稀释

(现配现用)

D. 生物素化抗体稀释液

16 mL

16 mL

16 mL

即用型

E. 浓缩酶结合物(避光 100×

30 μL

60 μL

2×60 μL

按说明书进行稀释

(现配现用)

F. 酶结合物稀释液

16 mL

16 mL

16 mL

即用型

G. 浓缩洗涤液(20×

16 mL

16 mL

25 mL

即用型

H. 显色剂(避光)

6 mL

6 mL

12 mL

即用型

I. 终止液

12 mL

12 mL

12 mL

即用型

4或常温保存

J. 预包被96孔板

8×3

8×6

8×12

即用型

密封干燥4保存

K. 封板胶纸

1

2

4

即用型

终止液和显色剂具有腐蚀性,一旦接触到液体,请尽快用大量清水冲洗。


产品介绍
Human MCP-1 ELISA Kit (Human Monocyte Chemoattractant Protein-1 Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ,即人单核细胞趋化蛋白 1 ELISA 试剂盒,可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 MCP-1 浓度。

单核细胞趋化蛋白 1 又称单核细胞趋化和激活因子 (MCAF),属于 C-C 亚族(β亚族)成员,是一种对单核细胞具有特异性趋化及激活活性的细胞因子,是吸引单核细胞浸润到肿瘤及组织中的有效介质。人 MCP-1 是由 76 个氨基酸残基构成的碱性蛋白质,基因定位于第 17 对染色体。人 MCP-1 前体蛋白有 99 个氨基酸残基,切除 23 个氨基酸的信号肽后形成 76 氨基酸残基的成熟 MCP-1 分子。非糖基化的 MCP-1 分子量为 8.7 kDa,经不同糖基化后 MCP-1 分子量有 13 kDa 和 15 kDa 两种。MCP-1 分子中 11 与 36 Cys 和 12 与 52Cys 之间所形成两个链内二硫键以及 Try 28 和 Arg 30,这两个二硫键对于 MCP-1 的生物学活性是必需的。在氨基酸水平上,MCP-1 与另外两种单核细胞趋化蛋白 MCP-2 (HC 14)和 MCP-3 (NC 28)分别有 62%和 72%的同源性,与 C-X-C 亚族中 IL-8 有 24%同源性。
MCP-1 可由多种细胞产生, 如内膜细胞、单核/巨噬细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞及某些肿瘤细胞等,而这些细胞合成分泌 MCP-1,受 IL-1、TNF 等多种细胞因子的调控。MCP-1 还能诱导单核细胞表面粘附分子的表达及细胞因子 IL-1 和 IL-6 的表达,可调节单核细胞的多种功能。体内和体外实验均证实了 MCP-1 对单核细胞具有趋化活性,可激活单核细胞和巨噬细胞,使其胞浆内 Ca2+浓度升高,产生和释放超氧阴离子,并释放溶菌酶,上调单核细胞和巨噬细胞粘附分子如 integrin 家族β 2 组和α 4 分子的表达和细胞因子 IL-1、IL-6 的产生,活化的巨噬细胞可抑制肿瘤细胞的生长。
MCP 是嗜碱性粒细胞的趋化剂和激活剂,尤其是刺激嗜碱性粒细胞脱颗粒和组胺释放的作用较为强烈。MCP-1 与 MCP-1 R 发生特异性的结合,此受体主要分布于单核细胞、髓样前体细胞系和嗜碱性粒细胞,属于 IL-8 R 家族。风湿性关节炎病人的滑液和血清中MCP-1水平明显升高。胃癌,食管鳞状细胞癌,恶性胶质瘤和卵巢癌,胰腺癌,膀胱癌及乳癌几种癌症中MCP-1水平上调。肾脏炎症时,IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。高胆固醇血症时,动脉内侧平滑肌细胞产生高水平MCP-1,单核细胞粘附于血管壁并浸润动脉壁。高血脂症时,LDL与肾小球细胞结合,刺激其产生 MCP-1,趋化单核细胞在局部浸润。肾脏炎症时,IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人 MCP-1浓度。在人MCP-1单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品,其中的MCP-1会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗人MCP-1抗体,抗人MCP-1 抗体与结合在单抗上的人MCP-1结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有MCP-1,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色;加终止液变为黄色。在450 nm下测OD值,人MCP-1 浓度与OD 450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出样品中人MCP-1浓度。

说明书:


 UE-H6134S/H6134M/H6134L    

常见问题解答:


背景信号强是什么原因?
1.洗板不充分。将洗涤缓冲液加入孔中洗涤,确保孔区域洗涤充分;确保已在洗涤前弃去所有残留抗体溶液;增加洗涤次数。
2.链亲和素-HRP结合物过量。检查偶联物的稀释度,在推荐的稀释度下使用。
3.封闭不充分。检查封闭液;延长封闭时间。
4.孵育时间过长。缩短孵育时间。
5.样品或标准品中含干扰物质。设置对照。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

没有信号?
1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验;检查试剂配制方法;复核试验试剂添加流程。
2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。
3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量;增加抗体用量(浓度)。
4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。
5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板,而非组织培养板;使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

整块板呈现规则蓝色?
1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。
2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。
3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。
4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。

标准曲线差?
1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。
2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板,而非组织培养板;使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。
4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。
5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。
6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。

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