产品概述：
产品内容
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组分 |
24T |
48T |
96T |
使用方法 |
开封后保存条件 |
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A. 标准品 |
2000 pg |
2000 pg |
2×2000 pg |
按说明书进行稀释 |
-20℃可存放一月 |
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B. 标准稀释液 |
16 mL |
16 mL |
16 mL |
即用型 |
4℃可存放一月 |
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C. 浓缩生物素化抗体（100×） |
30 μL |
60 μL |
2×60 μL |
按说明书进行稀释 （现配现用） |
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D. 生物素化抗体稀释液 |
16 mL |
16 mL |
16 mL |
即用型 |
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E. 浓缩酶结合物（避光 100×） |
30 μL |
60 μL |
2×60 μL |
按说明书进行稀释 （现配现用） |
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F. 酶结合物稀释液 |
16 mL |
16 mL |
16 mL |
即用型 |
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G. 浓缩洗涤液（20×） |
16 mL |
16 mL |
25 mL |
即用型 |
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H. 显色剂（避光） |
6 mL |
6 mL |
12 mL |
即用型 |
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I. 终止液 |
12 mL |
12 mL |
12 mL |
即用型 |
4℃或常温保存 |
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J. 预包被96孔板 |
8×3 |
8×6 |
8×12 |
即用型 |
密封干燥4℃保存 |
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K. 封板胶纸 |
1张 |
2张 |
4张 |
即用型 |
注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
储存条件
4℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。
产品介绍
Human GM-CSF ELISA Kit (Human Granulocyte- Macrophage Colony Stimulating Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 GM-CSF 浓度。
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (granulocytemacrophage colony stimulating factor, GM-CSF)，又称 CSF-2，是一种分子量 30kDa 的多效性细胞因子。人 GM-CSF 前体蛋白由 144 个氨基酸残基组成，包含 17 氨基酸的先导序列，成熟的人 GM-CSF 分子由 127 个氨基酸残基组成，以单体形式存在。成熟的人 GM-CSF 在氨基酸水平与小鼠，大鼠和猪分别有 55％，63%和 68%的同源性。人与小鼠 GM-CSF 没有交叉的生物学活性，与猪 GM-CSF 有交叉的生物学活性。
GM-CSF 主要是通过与高亲和力的受体复合物结合发挥生物学效应。IL-3 受体 (IL-3R)结合发挥生物学效应。人和小鼠 GM-CSFR 均由α、β两条链组成，单独α链与配体的结合为低亲合力，β链单独不结合配体，但与α链共同组成高亲和力受体，在信号转导中起主要作用。GM-CSFR α、β两条链胞膜外结构均属于造血因子受体超家族（红细胞生成素受体超家族）成员。GM-CSFR β链为 IL-3、IL-5 受体所共用。
T 细胞、B 细胞、NK、巨核细胞、骨髓间充质干细胞、肥大细胞、内皮细胞、单核细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞、嗜酸细胞、软骨细胞和成纤维细胞等均可产生 GM-CSF。作为造血因子中的重要一员，GM-CSF 具有多种生物学活性，可刺激骨髓细胞，粒细胞，巨噬细胞祖细胞，红样，巨核细胞祖细胞，AML，白血病细胞系，内皮细胞增殖；促进造血；活化中性粒细胞促进 ADCC，氧化代谢，脱颗粒和细胞因子的分泌；降低血清胆固醇等。
本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中人 GM-CSF 浓度。在人 GM-CSF 单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 GM-CSF 会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人 GM-CSF 抗体，抗人 GM-CSF 抗体与结合在单抗上的人 GM-CSF 结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 GM-CSF，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，人 GM-CSF 浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人 GM-CSF 浓度。
常见问题解答：
◆背景信号强是什么原因？
1.洗板不充分。将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保孔区域洗涤充分；确保已在洗涤前弃去所有残留抗体溶液；增加洗涤次数。
2.链亲和素-HRP结合物过量。检查偶联物的稀释度，在推荐的稀释度下使用。
3.封闭不充分。检查封闭液；延长封闭时间。
4.孵育时间过长。缩短孵育时间。
5.样品或标准品中含干扰物质。设置对照。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。
◆没有信号？
1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。
2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。
3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。
4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。
5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。
◆整块板呈现规则蓝色？
1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。
2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。
3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。
4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。
◆标准曲线差？
1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。
2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。
4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。
5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。
6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
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